鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水,采用冷凍干燥工藝制備。本發明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備,較傳統的止血材料不可吸收、容易引起機體過敏、止血效果差等缺點,本發明所制備的止血材料具有人體內可吸收,生物相容性好;止血效果快,具有很強的親水性;同時可啟動血小板的凝聚,一旦血小板凝聚,就可形成血栓,進而促使血漿結塊阻止血流。同時,膠原表面的特定區域可以與細胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結合,可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原醋酸溶解:稀釋一定數量的膠原溶液。深圳鼠尾膠原生產廠家
膠原蛋白分離提純實驗方案:提取鼠尾膠原蛋白的實驗步驟:1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進行酶解,持續一段時間待混合物變成無色、透明、粘稠液體后即可在4℃,5000g的離心力下離心20min,收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液。2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,持續攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出,繼續加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,4℃,5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續反復進行鹽析處理,重復步驟2的過程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經SDS-PAGE蛋白質電泳。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。青島正規鼠尾膠原銷售廠家制備鼠尾膠原:按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液。
一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結合的工藝,保持恒低溫無菌的環境,利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心,簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中,進行多次真空冷凍干燥,并經進一步處理獲得含水率在3%以下的膠原蛋白微粉;較后由滅菌、無菌包裝,成品膠原蛋白粉末的純度在98%以上。本發明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,提高了產率和生物相容性,降低了成本,適用于生物醫用材料。
鼠尾膠原包被培養板:胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上培養人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠原包被的培養板,貼壁24-48h后,培養基換為含不同輔助因子和內皮細胞生長添加劑的EGM-2內皮細胞培養基。結果與結論:①在EGM-2內皮細胞培養基誘導下,細胞逐步表達內皮細胞特異性標記基因VEGFR-2、PECAM1、vWF、CD34、VE-cadherin、GATA-2。②分化細胞表達內皮細胞特異性標記VE-cadherin、CD31。③分化細胞具有吞噬低密度脂蛋白功能。說明將人胚胎干細胞接種在鼠尾膠原包被培養板上,通過EGM-2內皮培養體系誘導,可直接分化為功能性血管內皮細胞。為研究胞外基質對誘導胚胎干細胞血管內皮細胞分化的作用以及相關信號分子機制打下了基礎。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。鼠尾膠原醋酸溶解:在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。
鼠尾膠原蛋白I型,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。建立利用自制的鼠尾膠原培養大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。鄭州鼠尾膠原
免疫組織化學結果和掃描電鏡證實所培養的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。深圳鼠尾膠原生產廠家
一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調節pH=6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時,去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀;2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液,冰水浴中,調節PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂、陰離子交換樹脂進行脫鹽處理;(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液,-40至-20°C預凍2?4小時,然后真空冷凍干燥,凍干產品經進一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉,滅菌、包裝,得到成品膠原蛋白粉末。深圳鼠尾膠原生產廠家